Sanger Секвенирование Sanger недавно было использовано для оценки обогащения мутанта DNA из смеси 1:20 мутант: дикий тип DNA. Вариант DNA, содержащий мутацию, был получен из линии клеток рака молочной железы, о которой известно, что она содержит мутации p53. Сравнение хроматограмм секвенирования Sanger показало, что мутант allele был обогащен 13 fold при использовании COLD-PCR по сравнению с одним традиционным PCR. Это определяли по размеру пиков на хроматограмме в месте варианта allele .
кроме того, COLD-PCR был использован для обнаружения мутаций p53 в образцах аденокарциномы легких. В ходе исследования было обнаружено 8 мутаций низкого уровня (менее 20%), которые, вероятно, были бы пропущены при использовании обычных методов, не обогащающих конкатенацию вариантов DNA .
пиросеквенирование и COLD-PCR
было показано, что аналогично его использованию в прямом Sanger секвенировании, с пиросеквенированием COLD-PCR способен обнаруживать мутации, которые имели распространенность 0,5-1% от используемых образцов. COLD-PCR использовался для KRAS выявления мутаций p53 и KRAS путем пиросеквенирования, и было показано, что он превосходит обычный PCR в обоих случаях.
Изображение 134A | Полный COLD-PCR против Fast COLD-PCR. | Матрудо / Public domain | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Fast_versus_Full_COLD-PCR.jpg) из Wikimedia Commons
Автор : Milos Pawlowski
Комментарии
Отправить комментарий