прямой и обратный праймеры ковалентно прикрепляются к слайду в проточной ячейке с высокой плотностью. Отношение праймеров к матрице на носителе определяет поверхностную плотность амплифицированных кластеров. Проточная ячейка подвергается воздействию реагентов для удлинения на основе полимеразы, и праймирование происходит, когда свободный / дистальный конец лигированного фрагмента «соединяется» с комплементарным олиго на поверхности. Повторная денатурация и удлинение приводит к локализованной амплификации DNA фрагменты в миллионах отдельных мест на поверхности проточной кюветы. Твердофазная амплификация дает 100–200 миллионов пространственно разделенных кластеров матрицы, обеспечивая свободные концы, к которым затем гибридизируется универсальный праймер для секвенирования, чтобы инициировать реакцию секвенирования. Эта технология была подана на патент в 1997 году Женевским институтом биомедицинских исследований Glaxo-Welcome (GBRI) Паскалем Майером, Эриком Кавашима и Лораном Фаринелли и впервые была публично представлена в 1998 году. В 1994 году Адамс и Крон подали заявку на патент. патент на аналогичную, но неклональную операцию поверхностной амплификации, названную «мостовой амплификацией», адаптированную для клональной амплификации в 1997 году Чёрчем и Митрой.
Изображение 155A | Технология PacBio SMRT и Oxford Nanopore могут использовать неизмененный DNA для обнаружения метилирования. | Нивретта Тхатра / CC BY-SA (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/legalcode) | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:3rd_gen_Epigenetics.png) из Wikimedia Commons
Автор : Yavor Mendel
Комментарии
Отправить комментарий