в молекулярной биологии лигирование - это соединение двух фрагментов нуклеиновой кислоты с помощью фермента. Это важный лабораторный процесс молекулярного клонирования DNA, посредством которого DNA фрагменты соединяются вместе для создания рекомбинантных молекул DNA, например, когда чужеродный фрагмент DNA вставляется в плазмиду. Концы DNA фрагментов соединяются вместе путем образования фосфодиэфирных связей между 3'-гидроксилом одного DNA конца с 5'-фосфорилом другого. RNA, кроме того, может быть лигирован дополнительно. В реакции обычно участвует кофактор, обычно это ATP или NAD.+.
лигирование в лаборатории чаще всего выполняется с использованием Т4 DNA ligase, однако, более популярны процедуры лигирования без использования стандарта DNA ligase .
перевязочная реакция
механизм реакции лигирования был впервые выяснен в лаборатории Роберта Лемана. Два фрагмента DNA могут быть соединены вместе DNA ligase, который катализирует образование фосфодиэфирной связи между 3'-OH на одном конце цепи DNA и 5'-фосфатной группой другого, У животных и бактериофага ATP используется в качестве источника энергии для лигирования, с другой стороны, у бактерий используется NAD +.
Изображение 092A | 9. Приготовление кодецитов / кодевирионов. Просто смешайте клетки / вирионы с раствором FSL (содержащим 1 или несколько FSL) и инкубируйте в течение 10–120 минут при 37 ° C (или при температуре до 4 ° C). Конструкции будут самопроизвольно включаться в мембрану, и никаких дополнительных действий не требуется. | Xiphiaz / CC BY-SA (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0) | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Preparation_of_kodecytes_and_kodevirions.svg) from Wikimedia Commons
Автор : John Kaisermann
Комментарии
Отправить комментарий